有效的培养方法
1、培养基配方
诱导及增殖培养基 MS+BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L。
继代培养基 MS+BA 0.3~0.6mg/L+NAA 0.2mg/L。
生根培养基 1/2 MS+NAA 0.5mg/L。
2、培养程序
(1)取材 以花枝部未萌发的幼芽作为外植体效果最好。打芽母株要选择无病虫害浸染,花色纯正,花刷大而且整齐的单株。取植株基部抽出的20~30cm花茎基部的1~3个未萌发的芽进行组织培养。顶部刚开始萌发的花芽也可以用作外植体,但效果稍差。
(2)灭菌 将花枝基部的<切成每节带1个腋芽,长度1~1.5cm的切段,用自来水冲洗后在稀的洗衣粉水中洗涤3~5min,漂洗干净,再在75%的酒精中表面消毒20s,转入0.2%的升汞溶液中消毒30min,取出后在无菌水中充分漂洗3~4次,切去茎段两头的受损组织,接种于诱导培养基中。
(3)生长及分化 茎段接种于诱导培基以后,7~10d侧芽开始萌动,20d后腋芽长大,继续培养则分化成丛生芽;将芽切下并进行分割后,继续转接在诱导培养基上进行扩繁,20d后在叶腋之间便会分化出许多浅红色的丛生芽点。通过不断的切割和转接,1个芽在2~3个月内就可以繁殖到近百瓶,在诱导培养基上进行多代增殖以后,苗一般比较细弱,且呈密集丛状,直接进行生<培养分株较难,而且由于细胞分裂素残存不易生根,此外种苗开花后的品质较差。为了获得高质量的种苗,一般在增殖到一定的数量,转入正常的维持生产(即同时进行繁殖与生根)后,繁殖苗要在细胞分裂素水平稍低的培养基上进行继代,使其繁殖系数降低,才能同时保证生根和增殖苗<质量。继代时间最好不要超过20d ,否则组培苗会出现老化细弱,甚至死亡的现象。
(4)生根培养 在继代培养基<培养15~18d后,将苗高2~3cm的小苗分割成单株,切去周围的愈伤组织和小芽,转入生根培养基中。一般培养10d左右开始长根,15~20d小苗明显长高,叶色浓绿,并有良好<根系,此时便可以将小苗取出进行移栽。
质量标准及调控技术
勿忘我瓶苗的质量标准是叶色浓绿,根系良好,生根苗单生不成丛,苗高3~4cm,基部及外围叶片无发黄现象。
在培养基的使用上,要根据品种的特性来调节激素用量,使用的标准以既要保证生根苗的质量,又要维持其正常的增殖系数和生根数量为宜。细胞分裂素的浓度过高,会出现发苗过多,芽丛成球状翻卷,小苗变矮、变脆,叶片增厚,不能分株生根等现象,严重时还会出现玻璃和形态变异;细胞分裂素浓度过低又会影响其增殖系数和组培苗规模化生产中的产量。在所有色系的品种中,深蓝色系的品种一般萌芽率较低,可以使用稍高浓度的细胞分裂素,而其他各色系如黄、粉、桃红等品种由于自然萌芽率洌易成丛状苗,所以对杂色品种应选用较低的细胞分裂素,以便保证其生根苗的质量。在生根培养时,添加少量的抗生素如链霉素、青霉素等对促进生根、防止生根苗变黄有一定的效果。高丽霞等人进行生根试验后认为将MS换成LS培养基并适当增加KH2PO4的用量,其配方为1/2LS+NAA 1.0mg/L+KH2PO42.0mg/L+1.5%糖,可使生根时间提早,且根系粗、短。在过渡阶段喷施0.2%的LS营养液可提高过渡成活率。在生根培养过程中,苗的叶片数增加不多,以叶片伸长和长大为主,所以在选择单株进行生根培养时,应选留株型完整,叶片较多的分化苗。
环境调控,主要从光照强度、时间、温度、湿度等几个方面进行,在繁殖阶段需要光照强度较生根时要稍强一些。对勿忘我进行切花栽培的温度要求较高,但是在组培时,温度在25℃以内比较好,过高的温度会加速乙烯的产生,引起苗的快速衰老和死亡。通过试验比较,将生根苗培养在培养架的1~2层(由下至上),生根速度和生根量均较其上几层要好,而且摆放在最高一层的生根苗生根率很低,叶片黄化和死亡的比例较高,原因是下层温度稍低,光照也稍弱一些。在大规模的生产中将繁殖苗摆在上面几层,生根苗摆在下面几层,或将一些耐热种类放在培养架的上层,既可以充分利用空间,满足各个种类的生长需求,又能提高种苗的质量。此外,采用湿度相对较高的封闭膜进行培养瓶的封口有利于生根苗的生根及生长,对提高生根率、减少小苗叶片的黄化现象有一定的作用。
出瓶苗的过渡管理
将生根苗从瓶子中取出,用清水洗去根系上的琼脂,在清洗的过程中动作尽量要轻,注意不要将根系拉掉,否则根系受损和脱落均会严重影响其移栽成活率。过渡基质以腐殖土最好,过渡移栽可用浅果箱,也可以用育种穴盘直接移栽,以方便运输和销售。定植后要浇透定根水,在移栽的初期要注意遮荫,在过渡缓期以后,可以逐渐增加光照。因勿忘我的叶片比较大而且薄,容易使叶片灼伤,要避免在阳光下暴晒。在腐殖土中过渡只需注意病虫的防治,一般没有特殊情况可以不进行施肥,勿忘我成活以后生长较快,1个月后小苗长成高5~6cm的小植株,即可下地定植。