(-)国内外研究概况
红掌是天南星科花烛属多年生附生常绿草本花卉,又名大叶花烛、台灯花、火鹤花、安祖花等。红掌株高可达1m,节间较短;叶n根茎抽出,具长柄,单生,长圆状心形或卵圆形,深鲜绿色,有光泽;花葶自叶腋抽出,其花序为肉穗花序,具有红色、粉红色、白色及五彩色的蜡质佛焰苞,终年开花不断,是当前国际流行的名贵花卉。
红掌性喜高温多湿的环境,繁殖一般以分株为主,偶尔也用扦插等方法,自然繁殖速度很慢。关于红掌组织培养的研究报道较多。1986年Keller等人用MS+KT 2mg/L培养基作叶插m养,1~2个月便可形成愈伤组织。1990年Ightboarn等人报道,2,4-D 0.5MG/L对叶片愈伤组织的诱导效果最好,增加NH4NO3浓度可使片繁殖加快。1992年Kuehrle-A.等用4种杂交幼苗的叶片在培养基1/2 MS+2,4-D 1.0~4.0mg/L+KT 0.33~1.0mg/L中进行组织培养,发现2%蔗糖+1%葡萄糖比3%蔗糖更利于胚培养,在黑暗中培养一个月有半透明的胚胎发生。1993年复旦大学的研究表明,在幼苗微培养中,昼长夜短可诱导愈伤组织生长,3%葡萄糖对愈伤组织形成是最有效的。用MS+BA 1.0mg/L有利于芽的诱导,而1/2MS+NAA 0.1mg/L则有利于根的形成。1996年王志武等人通过降低培养讨械囊恍┏煞郑成功地对其进行了工厂化生产。此外,李孟超于2000年对红掌组培苗成功地进行了无糖生根培养,对组培技术起到了一定的发展和完善作用,尤其在组培工厂化规模育苗生产中,具有广泛的应用空间和发展前景。
(二)有效的培养方法
诱导培养基 MS+BA 0.5mg/L+2,4-D0.8mg/L。
增殖培养基 M6+BA 2.5mg/L+2,4-D0.1mg/L。
生根培养基 1/2 MS+NAA 0.5mg/L。
2、培养程序
(1)取材 应在品种纯正、花大色艳的单株上进行。一般采用刚展开的幼嫩叶片作为外植体效果较好。
(2)灭菌 将叶片放在盛有洗洁精的烧杯中搅拌10min后,用自来水冲洗15min,除去洗洁精表面s物,接着在无菌条件下,先用75%的酒精消毒30s,再在0.1%的升汞溶液中浸沟8~10min,无菌水洗5~6次,将叶片切成1.5cm2的小块,接入诱导培养基。
(3)生长及分化 叶片在诱导培养基中培养约1个月后,切割处便出现少量的淡黄色愈伤组织,2个月后,叶片愈伤组织的诱导率可达到83.3%。将愈伤组织块转移到分化培养基中继续培养,60d以后平均每块愈伤组织可分化4.94个不定芽。
(4)生根培养 当不定芽长到2.5~3.0cm,具有3~4片叶时,可将其切成单株在生根培养基上进行生根培养,30d后即可长出3~4条根,生根率可达100%。
(三)质量标准及调控技术
红掌愈伤组织的诱导及形成十分缓慢,接种20d后,叶片仍为绿色,1个月后,叶片切口处才会出现少量黄色泡状的愈伤组织,1个半月后,泡状愈伤组织形成黄绿色瘤状突起,2个月后不断扩大连成一片,然后逐渐出现锥状突起,并形成红色的幼芽。在培养中发现,单独使用BA不能诱导叶片产生愈伤组织,只有同时使用生长素才能产生愈伤组织。在与BA配合使用的生长素中2,4-D诱导率较高,NAA其次,IBA的效果最差。在分化培养中,不同细胞分裂素对分化芽的效果不同,BA与ZT的效果较好,KT较差。在规模化生产中考虑到ZT的价格大大高于BA,所以一般使用BA进行分化及继代培养。另据研究结果表明,大量元素的全量与半量对红掌愈伤组织的诱导影响不大,但对p分化有一定的影响,在相同激素水平下,1/2MS处理,不定芽的分化率显著高于MS处理,所以在不定芽的分化继代培养中,有人建议采用1/2MS培养基。一般红掌较易生根,一定浓度的生长素均可促其生p。
另外,在红掌的组织培养中,采用浅层液体静置培养基,其增殖率远远高于固体培养基,且生长周期缩短,成本降低。因此,在进入大量增殖阶段后,即可改为液体培养。生根培养也可采用浅层液体静置培养的方法。
(四)出瓶苗的过渡管理
当试管苗长出3~4条根时,即可出瓶移栽。出瓶前,先将试管苗移出培养室,打开瓶盖,置于通风明亮的常温房间里,每天早、中、晚各喷水1次,以保持足够的湿度。5d后,将试管苗从瓶中移出,用清水洗净根系上的培养基,用0.5g/L的高锰酸钾蘸根消毒后,移栽到表土与腐殖土混合的基质上,淋水后,罩上透明塑料薄膜以保持空气湿度,10d后打开保湿罩,逐渐降低湿度并增强>照,30d后成活率可达到90%以上。
红掌试管苗移栽方法简单易行,对基质的要求不高,采用沙土、沙混表土或沙混黄土作为移栽基质均可达到较高的成活率,但从植株长势等方面来看,移栽在表土中的试管苗生长健壮,叶色浓绿,长势较好。红掌原产地经常雾雨不断,故性喜空气湿度高而又排水通畅的环境,喜阴,喜湿热。生长季节每日除浇水外,还要给植株喷雾。终年最低温度应保持在18~20℃。需清晨或傍晚的阳光,忌强烈日光。