当前位置 > >网站首页 >组培纵览 >传统组培
试管苗的增殖与继代培养
发布时间:2015-06-23

(一)、加快试管苗的繁殖速度

1、试管苗繁殖类型

试管繁殖类型共有五种:微型扦插型、丛生芽增殖型、器官发生型、胚状体发生型、原球茎发生型,一定要注意其遗传稳定性, 前三种途径一般能保持遗传稳定性。

2、试管繁殖速率及计算

统计试管苗增殖速度, 有以苗为单位, 也有以芽或未生根的小茎作单位的, 以原球茎球状体或胚状体因难以统计, 则以瓶为单位。大多数以芽和苗作单位。

试管苗理论上一年能繁殖多少, 可用下面的简单公式计算:

Y = mXn

Y = 年繁殖数

m = 无菌母株苗数

X = 每个培养周期增殖的倍数

n = 全年可增殖的周期次数

例如月季每5 周转接一次, 甲品种每次增殖3 倍, 乙品种每次增殖5 倍, 丙品种每次增殖7 倍, 假定一开始都是一个芽, 那么这三个品种一年能繁殖多少呢? 根据公式可知:

n =365d/35d= 10 .4 , 即每年可转接10 次, 那么这三个品种年繁殖率分别计算如下:

甲品种Y = 1×31 0 = 59 000 = 5 .9×104

乙品种Y = 1×51 0 = 9 760 000 = 9 .76×106

丙品种Y = 1×71 0 = 282 000 000 = 2 .82×108

从上可知甲品种每5 周转接一次, 一年可繁殖出5 万多苗, 乙品种每周期增殖5 倍, 一年可得900 多万苗, 而丙品种每周期增殖7 倍, 一年可繁殖出2 亿苗来。

不过实际值远比理论值为低。因为实践中要受到多种因素制约, 困难很多。但理论计算可以作为一个计算产量的指标, 提供参考, 有它的积极意义。

3、提高繁殖速度的方法

不仅试管苗的繁殖类型不同, 而且在试管内又受到基因型、外植体来源、年龄、部位、培养基种类、附加成分和培养环境等多种因素的影响, 应通过具体试验来摸索每种植物最快最好的繁殖方法。

1)、改进培养基:

a不同的植物材料需要使用不同类型的培养基。

b糖具有维持培养基渗透压的作用,在培养过程中植物组织不断地从培养基中吸收糖,糖浓度降低,当糖浓度不能维持正常渗透压时,材料要转移到新鲜培养基。培养基中的维生素绝大部分为B族维生素,它们一各种辅酶的形式参与植物代谢活动,影响形态发生、分化及试管苗的生长,为防植物缺乏,一般均加入。

c、植物殖さ鹘谖镏试谑怨苊缭鲋持衅诰龆ㄐ宰饔

A、促进叶芽形成和生长的激素:细胞分裂素抑制了植物的顶端优势,使得叶芽不断分化和生长,逐渐形成芽丛,并促进芽丛生长。大多植物最适用量为1.0~2.0,一钟昧0.1~10.0。应用最多的是6-BA,其次KT和2ip,ZT用的较少,因它的价格太贵。对于微型扦插型繁殖可不加细胞分裂素或加0.1以下也可。除了细胞分裂素以外,还可加入低浓度的生长素,以促进叶芽的生长,但要防止愈伤组织化。常用的有NAA,IBA,IAA,浓度在0.1~1.0。

在实际操作中高浓度细胞分裂素和低浓度生长素的配比,既能提高腋芽的增殖速度,也能保证腋芽健壮生长。如果细胞分裂素浓度过高生长素浓度过低,会形成过于细密的嫩芽,虽然提高了增殖速度,但苗多而弱,降低了p的质量。但如果细胞分裂素过低,生长素过高,影响芽的增殖速度,甚至有时没有侧芽产生。

B、诱导不定芽形成和生长的激素:除现有的芽之外, 任何器官上的, 通过器官发生重新形成的芽称为不定芽。促进外植体形成不定芽, 要使用一定量的细胞分裂素和生长素, 一般浓度不能过高。否则不但使器官分化能力降低, 而且也使遗传性难以稳定。

诱导外植体形成不定芽时, 一使用细胞分裂素的浓度高于生长素浓度的配比, 但也经常采用细胞分裂素和生长素浓度的比值接近于1 的配比。

C、促进胚状体的形成和繁殖的激素:胚状体途径的优点是增殖率高, 而且同具有胚根和胚芽, 可免去生根。现在胚状体发生还不普遍或产生的胚状体难以成株或成株率太低, 以及遗传性尚不稳定, 故仅在有限植物中应用。一般是在含有丰富还原氮的培养基上, 加有生长素, 特别是2 , 4 - D 以诱导胚状体的生, 然后转移到降低浓度或没有生长素的培养基上使其成熟、萌发和生长。

培养基中, 还可加入其他附加成分, 如氨基酸、水解乳蛋白( LH ) 300mg/ L~500mg/ L、水解酪蛋白(CH) 200mg/ L~500mg/ L, 以及腺嘌呤(ADE) 1mg/ L~80mg/ L 等, 以促进试管苗的生长。

2)、改善培养条件:试管苗增殖与培养条件如p度、光照、湿度、培养器皿和培养基的pH值密切相关, 需要进行控制, 以促进繁殖。


点击排行

图说组培

组培文库

Copyright@ 2012,zupei.com All rights reserved. 济南普朗特生物科技有限公司版权所有 电话: 400-6968-123 组培设备及耗材专业制造商
服务信箱: webmaster@zupei.com 传真:0531-82373396 “鲁ICP备05017979号”