光照是组织培养中的重要外界条件之一，它对外植体生长和分化有很大的影响，表现在光照、光质和光周期等方面。
有的材料适合光培养，有的则适合暗培养，如玉簪花芽和花茎的培养，前者愈伤组织的诱导，以暗培养比光培养下的高，而后者则只有暗培养才能诱导出愈伤组织。l些植物（如荷兰芹）的组织培养中其器官形成不需要光，而在另一些植物，如黑穗醋栗，光可显著提高其幼苗的增殖。
光质也明显影响外植体愈伤组织的诱导、组织的增殖及其器官分化。如对杨树愈伤组织的生长，红光有促进作用，蓝光则有阻碍作用。在百合珠芽增殖和分化时发郑在红光下8周后不仅产生愈伤组织，同时可以直接分化出苗，11周后所产生的愈伤组织也分化出苗；而在蓝光下12周后才出现愈伤组织；白光下则未见愈伤组织的形成，可见红光能促进生长和分化。与白光和黑暗条件相比，蓝光明显促进绿豆下胚轴愈伤组织的形成（王晓明等）。在用白、红、绿、蓝等不同光质培养双色花叶芋时，发现不同光质不仅能影响培养物的生物总量，还能影响器官发生，其中以黄光诱导发生的频率最高（倪德祥等）。关于光质对不同种类材料的试管苗增殖和分化的影响不一致，可能与植物组织中的光敏色素和隐花色素有关。
关于光周期对⒐苊缤庵蔡宓脑鲋澈头只，通常都选用一定的光周期来进行外植体的组织培养，如光周期为16h光照、8h黑暗。有人发现非洲菊的增殖随光照时间的延长而加快，但超过16h又无作用。在石刁柏的茎尖培养中，根和茎的分化需要每天16h1000Lux照度的光照；而菊芋块茎培养中，每天12h光照就有利于根的形成。对短日照敏感的葡萄品种，其茎切段的组织培养物只有在短日照条件下才能形成根；反之，对日照长度不敏感的品种则在任何光周期下都能生根。