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外植体消毒方法
发布时间:2018-10-13

(一)茎尖、茎段及叶片等的消毒
植物的茎、叶部分多暴露在空气中,易受到泥土、肥料中的杂菌污染,消毒前需先经自来水较长时间的冲洗,特别是一些多年生的木本植株材料,冲洗后还要用沾有肥皂粉或洗洁精(或吐温)的软毛刷进行刷洗。消毒时先用75%酒精浸泡10-30s,以无菌水冲洗2-3次后,按材料的老、嫩和枝条的坚硬程度,分别采用2%-10%的NaClO溶液或0.1%HgCl2浸泡10-15min;若材料表面有茸毛或凹凸不平,最好在消毒液中加入几滴吐温80,消毒后再用无菌水冲洗3-4次后方可接种。
(二)果实和种子的消毒
视果实和种t的清洁程度,先用自来水冲洗10-20min,甚至更长时间。再用70%酒精迅速漂洗一次。果实用2%NaClO溶液浸10min,后用无菌蒸馏水冲洗2-3次后,就可取出果实内的种子或组织进行培养。种子则先要用10%NaClO溶液浸泡20-30min,对难以消毒的还可用0.1%升汞或1%-2%溴水消毒5min。
(三)根及地下部器官的消毒
由于它们长在土壤中,可预先用自来水冲洗、软毛刷刷洗,再用纯酒精漂洗后,置于0.1%-0.2%升汞浸5-10min或2%NaClO溶液浸泡10-15min,然后以无菌水冲洗3次,用无菌滤纸吸干水分即可接种。若条件许可,还可将材料浸入消毒液中进行抽气减压,以帮助消毒液渗入,达到彻底消毒的目的。
(四)花药的消毒
通常用于组织培养的花药,实际上多未成熟,由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护,基本上处于无菌状态,故只需将整个花蕾或幼穗消毒既可以了。一般用70%酒精浸泡数秒钟,然后用无菌水冲洗2-3次,再在漂白粉上清液中浸泡10min,经无菌水冲洗2-3次即可接种。

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