不定芽的诱导月季的常规繁殖方式主要靠扦插、嫁接和压条等,繁殖系数低,远远满足不了生产的需要。80年代初,采取组织培养方法快速繁殖月季苗,用侧芽、顶芽、并诱导生根。第一报道月季不定芽形成见Elliott(1970),他在聚花月季(Rosemultiflora)上成功地诱导了不定芽的形成,并诱导幼苗生根。Zieslin和Halevy(1976)报道细胞分裂素有利于提高不定芽的数量,但也诱导花器官败育或退化的频率。不定芽的诱导与供试材料的基因型有关,同时还与外植体的取材部位有关,来源于枝条中部的侧芽的繁殖速率最快(Bressan等,1982)。培养基中添加蔗糖有增加丛芽数量的作用(Langford和wainwright,1987);加入低浓度的GA能进一步改善芽繁殖,95%的外植体能产生7个以上的不定芽(Rout等1990)。能提高芽繁殖数量的物质还有月桂酸甲酯(Voyiatzi等,1995)、乙烯(Kevers等,1992)等。诱导不定芽的培养基为MS培养基添加低浓度的激素BAP03~05mg/L,NAA0004n03mg/L或IAA或GA00~20mg/L。[7]Martin等(1981)调查了2125个玫瑰侧:做外植体获得的无菌苗三年间在大田生长的情况,没有发现变异植株,这说明侧芽方式繁殖的玫瑰植株性状很稳定。
2.5增殖培养玫瑰的增殖培养,一靠无菌苗切段繁殖,二靠诱导不定芽,形成从生苗;三靠愈伤组织形成体细胞胚或原球胚。将已长大的月季嫩茎切成带1~2个节的茎段,投入新鲜的增殖培养基上,5~6周进行一次继代增殖,增殖系数平均达4~6。在外植到培养10~15d内第一叶的叶原基伸长,第二叶片叶原基可见;15~20d侧芽伸长;25~30d长度达6~10mm,继代增殖会按几何级数增长起来。[5]增殖培养基可用不定芽诱导培养基,如MS+BA03~05+NAA0004~03mg/L。
2.6壮苗与生根壮苗培养的培养基为:MS+BA03i05+NAA001~01或MS+BA03~05+IBA03t[4]也可以壮苗为主,增殖为辅,使增殖与壮苗合二为一。玫瑰组培苗增殖与壮t需光照10~12h,光照强度2000lx,温度24~26℃。
玫瑰在组培过程中,其生根能力因品种特性、所用植物材料及培养基成分而有较大差异,许多研究结果表明,玫瑰茎段微繁殖容易生根,使用植物激素IAA,IBA或NAA含量01~05mg/L,蔗糖含量2%~25%的MS培养基有利于玫瑰茎段生根。另外,光照、温度等对玫瑰微繁殖生根也有直接影响,Bressan等(1982)研究指出,光照时间每天12h以上,光照强度适宜则有利于生根。一般情况下,玫瑰茎段组织培养8~10d内则可生根。[6]加入适量的活性炭有利于玫瑰生根。
2.7炼苗与大田移栽炼苗和大田移植是玫瑰微繁殖获得成功的最后阶段。[6