原生质体（protoplast）是去除细胞壁的裸露植物细胞。Klercker在1892年第一次尝试用利刃对细胞进行机械切割而获得原生质体，产量和效率都很低。1960年，Cocking采用真菌培养物中的纤维素酶来降解番茄根细胞壁，获得原生质体。Takebe等（1971）首次获得烟草叶肉原生质体培养的再生植株。在20世纪80年代中叶，先后从水稻和油菜原生质体培养出再生植株。原生质体培养的研究成功，不仅是生命活动理论研究的一个良好体系，还可改良作为的某些性状，潜力巨大。

       原生质体卵再生植株技术是细胞融合（cell fusion）、体细胞杂交（somatic cell hybridization）的基础。体细胞杂交能使有性过程不能杂交的亲本之间进行遗传物质重组，在农作物育种上有广阔的应用前景。

       近一二十年来，原生质体培养取得了可喜的成果。据统计，1993年有分属于49个科、146个属的320多种植物，经原生质体培养得到了再生植株。其趋势主要是农作物和经济植物，但从一年生扩展到多年生，从草本到木本、从高度植物到低等植物，如食用菌、藻类等。原生质体培养目前已成为体细胞遗传学、遗传工程和改良梦锲分值确矫娴男峦揪丁

      一、设备与用具：植物原生质体培养是在植物组织培养的基础上建立的一门技术。因此，除了需要组织培养的设备与用具之外，还需要一些专门的仪器和用具：

      （一）倒置显镁怠⒂光显微镜及照相设备，检查原生质体或细胞培养密度，采用血球计数板，在普通显微镜或倒置显微镜下观察。观察培养皿、培养瓶或三角瓶中的培养物需用倒置显微镜。检查原生质体活性及去壁情况时，用荧光染料染色后在荧光显微镜下观察。显微镜一般都应备有显微照相设备，记迷生质体和细胞的生长状态。

      （二）细菌过滤器，酶液不能高温高压灭菌，因为高温高压会使酶钝化破坏。如果溶液中含有易被高温、高压破坏的物质时，必须用细菌过滤器过滤灭菌。一般用0.45um的滤膜可以滤去细菌和病毒。可用抽滤瓶接真帽贸槁嗣鹁，也可用注射器推压过滤灭菌。

      （三）离心机，分离提纯原生质体用500r/min离心3－5min，制备酶液用2500 r/min离心10min以除去残渣。

        二、化学试剂

      （一）无机化学试剂，与组织培养的无机化学试剂基本相同，一般要求使用分析纯试剂。

      （二）有机化学试剂，用于原生质体培养的有机化学试剂有5种：

       1. 维生素，除了组织培养常用的维生素之外，有时还加入泛酸钙（维生素B5）、叶酸、维生素A、维生素C、维生素D、氯化胆碱、对甲基苯甲酸等、值得注意的是，配制母液时，应先制备各个组分的贮液。叶酸应配制低浓度贮液，先溶于少量稀碱水中，加双蒸水定容即成贮液。

      2. 激素<BR>与组织培养的基本相同，注意生长素类和细胞分裂素类的适当搭配。

      3. 渗透压稳定剂，为了使原生质体维持在一定的渗透压下，既不涨破，又不因过度收缩而破坏内部结构，必须在酶液中加入渗透压稳定剂。常用的渗透压稳定剂是糖醇系统，包括甘露醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖等。目前大多数使用甘露醇或山梨醇，它们能稳定的维持渗透浓度。浓度一般为0.4-0.8mmol•L－1。蔗糖等易被原生质体吸收利用，降低渗透浓度。

      4. 碳源和氮源，原生质体也和植物细胞一样，不能自养生长，必须在培养基中加入碳源。最常用的碳源是葡萄糖和蔗糖。水解酪蛋白、谷氨酰胺、甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸等都可作为有机氮源。

     （三）凝胶剂，除了使用琼脂粉外，还有琼脂糖和一些国外的同类产品，如日实Gellan Gum。

       三、酶类，植物细胞壁由纤维素、半纤维素和果胶三种主要成分构成。一般认为，纤维素酶和果胶酶是分离原生质体必不可少的，有些材料还需要加入半纤维素酶。最常用的纤维素酶有日本队Cellulase Onzuka R-10，Cellulase Onzuka RS，美国的Cellulysin等；果胶酶有日本的Pectolyase Y23，Macerozyme和美国的Pectinase等。