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植物组织培养技术原理之接种方法
发布时间:2010-10-07

无菌操作
接种时由于有一个敞口的过程,所以是极易引起污染的时期,这一时期主要由空气中的细菌和工作人员本身引起,接种室要严格进行空间消毒。接种室内保持定期用1%―3%的高锰酸钾溶液对设备、墙壁、地板等进行擦洗。除了使用前用紫外线和甲醛灭菌外,还可在使用期间用70%的酒精或3%的来苏儿喷雾,使空气中灰尘颗粒沉降下来。无菌操作可按以下步骤进行:
(1)在接种4h前用甲醛熏蒸接种室,并打开其内紫外灯进行灭菌;
(2)在接种前20min,打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯;
(3)接种员先洗净双手,在缓冲间换好专用实验服,并换穿拖鞋等;
(4)上工作台后,用酒精棉球擦拭双手,特别是指甲处。然后擦拭工作台面;
(5)先用酒精棉球擦拭接种工具,再将镊子和剪子从头至尾过火一遍,然后反复过火尖端处,对培养皿要过火烤干;
(6)接种时,接种员双手不能离开工作台,不能说话、走动和咳嗽等;
(7)接种完毕后要清理干净工作台,可用紫外灯灭菌30min。
若连续接种,每5天要大强度灭菌一次。

接种
(1)将初步洗涤及切割的材料放人烧杯,带入超净台上,用消毒剂灭菌,再用无菌水冲洗,最后沥去水分,取出放置在灭过菌的4层纱布上或滤纸上。
(2)材料吸干后,一手拿镊子,一手拿剪子或解剖刀,对s料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm见方的小块;茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含l―2片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械,防止交叉污染。
(3)用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养s上。具体操作过程是:先解开包口纸,将试管几乎水平拿着,使试管囗靠近酒精灯火焰,并将管口在火焰上方转动,使管口里外灼烧数秒钟。若用棉塞盖口,可先在管口外面灼烧,去掉棉塞,再烧管口里面。然后用镊子夹取一块切好的外植体送入试管内,轻轻插入培养基。若是叶片直接附s培养基上,以放1―3块为宜。至于材料放置方法除茎尖、茎段要正放(尖端向上)外,其他尚无统一要求。放置材料数量现在倾向少放,通过统计认为:对外植体每次接种以一支试管放一枚组块为宜,这样可以节约培养基和人力,一旦培养物污染可以抛弃,接完种后,将管口在火焰上再灼烧s秒钟。并用棉塞,塞好后,包上包口纸,包囗纸里面也要过火。

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