二、有效的培养方法

1、培养基配方

诱导培养基  MS+BA 2mg/L+NAA 0.2mg/L或BA 2mg/L。

增殖培养基  MS+BA 2mg/L+NAA 0.5~1mg/L。

壮苗培养基  MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L。

生根培养基  MS+NAA 0.1~0.5mg/L。

2、培养程序

（1）取材  蟆叶秋海棠的叶片、叶柄、茎、茎尖、花梗、花器官和花药等均可用来进行组织培养

（2）灭菌  叶、茎尖等的取材用0.1%的升汞溶液消毒5~10min，无菌水漂洗4~5次。花药培养取处于单核晚期花药的花蕾，灭菌用饱和漂白粉上清液消毒20min，再用无菌水冲洗3~5次。

（3）生长及分化  灭过菌的叶外植体，用无菌滤纸吸去表面水分，接种在诱导培养基上，约5d组织块开始膨大、增厚、颜色变淡，10d左右在外植体表面与切口处形成小突起，20d在外植体表面形成肉眼可见的小芽（一般叶片上表皮形成丛生芽数多于下表皮），约30d左右形成明显的丛生芽，诱导率高达95%~98%，甚至达100%。芽基部及叶腋处又能萌生更多的腋芽和不定芽。无a系刚建立时，每块外植体长10个左右不定芽，随着培养时间延长，每块外植体上芽数增多，最多达100多个。外植体培养30d后，一方面可转移到壮苗培养基上促进小苗长高，部分不定芽可生根，形成完a小苗进行直接移植。另一方面，可转入液体增殖培养基中静置培养或旋转培养（150r/min）。在液体培养基中，不定芽在20d内可由0.2cm高长成3~5cm高的苗，而且液体培养得到的苗比固体培养基上的苗粗壮，也有部分生根苗可用于直接移栽。繁殖周期约60d，繁殖率培养初期为1:（2~3），后期1:（6~10）。液体养优势性表现为：不定芽吸收营养面积大，养分交流补充快，苗排出的代谢物分散快，减少自体抑制效应，也避免了琼脂中不利生长的有害杂质的影响，还降低了试管苗生产的成本和移栽成本，使移苗步骤简化，节省了人力。

（4）生根培养  将1~2cm高的芽苗，接入NAA（或IBA）0.2~0.5mg/L的培养基上，当生长素含量低时28d生根，含量高时10~14d便可长出根，根诱导率达100%，在长根的同时苗也随之长高。

三、质量标准及调控技术

蟆叶秋海棠出瓶时要求苗单株，有4~5片叶，苗高2~3cm，有1cm左右的根系。蟆叶秋海棠的不定芽再生激素范围较广，在多种激素组合及浓度下均可获得成功，在组培实际运用时，要根据当时的生长表现以及各个品种之间差异进行调整，丛生芽增殖阶段进行液体培养和适当降低细胞分裂素的用量可以达到获得壮苗的目的<

四、出瓶苗的过渡管理

当根长1cm左右时，便可移栽。移栽成活率90%左右，移栽成活的关键是注意出瓶前2~3d加强光照，移栽基质要消毒，栽后喷雾保湿，适时通风。移栽后半个月有新叶发生时，施（1/2~1/10）MS液肥（去掉有机成分，糖及激素），移栽后4~6个月即可成为商品苗。