1、外植体取材:切取鹤望兰的叶柄或短缩茎
2、冲洗:把取好的外植体用洗洁精清洗,然后放在水流下冲洗20min~30min,冲洗干净后放进超净台。
3、消毒:消毒药品为75%酒精和3%氯化汞,第一步,酒精消毒五分钟,然后无菌水冲洗2~3遍。第二步,氯化汞消毒15分钟,然后无菌水冲洗4~5遍。注意:在消毒和无菌水冲洗时,尽量摇晃瓶子,使外植体每个点都能接触,消毒、清洗更彻底。
4、修剪:修剪在消毒过程中受损伤的部分,然后放入培养基中。
5、增殖培养基:建立无菌体系后,需要转入增殖培养基。(1)增殖培养基为MS+6-BA2.0毫克/升+ZT1.0毫克/升+IBA0.1毫克/升+NAA0.1毫克/升;(2)生根培养基为,1/2MS+IBA0.5毫克/升+NAA0.5毫克/升。增殖培养基加蔗糖3%,生i培养基加蔗糖2%。
6、鹤望兰增殖期间光照2000lx,光照时间12小时,白天温度22°晚上20°