1 污染

污染是组培快繁过程中的头号“大敌”。根据发生的对象和出现的不同阶段，又分为以下几种:

1.1 外植体污染

从大田或温室采集的植物材料，均带有病菌。接种前流水冲洗1-2小时，接种时只接内部的分生组织，越小越好，以降低带菌率。然后要根据长势和苗龄灵活掌握消毒时间。消毒时间过长，易损伤材料组织；过短，消毒不彻底。有研究表明0.1～1%升汞消毒3-8分钟效果最好。

1.2 初培养污染

外植体表面消毒后，接种到培养基上。2-7天后，可观察到外植体周围出现白色晕圈或菌落。

1.2.1 白色晕圈

多数为细菌污染，是外植体表面消毒不彻底造成的。

对策一：可用0.1～0.5%的升汞加几滴吐温，消毒1-2分钟。

对策二，改用LP培养基。因为LP培养基(盐度为DKW和WPM盐度的中值)在降低有毒物渗出方s比DKW和WPM优良的多。

对策三，利用抗生素PVP、Vc8-HQC或Na-DIECA等。据报道，大多数抗菌素在达到抑菌作用时，对外植体本身也有毒害作用。但有一些抗菌素如利福平和Imipemem，对于大多数植物在产生极小毒副作用下，能对多种细菌起抑制作用。另据了解，对于很多植物而言，不同抗菌素结合起来使用比单独用一种，效果要好的多。

对策四，2-5天后把外植体转移到新培养基中。

1.2.2 菌落

外植体长出新芽以后，又出现有色菌落，这时的污染多是真菌污染。可用70%酒精加入适量抗菌素配成消毒液，将染菌苗浸泡5-7秒，然后用r菌水冲洗干净，接种到新培养基上。

1.3 继代培养中污染

此期试管苗污染也是常见的现象。原因很多：接种工具消<是否彻底；接种人员带菌，且不按操作规程操作；接种时是否在超净范围内；超净工作台过滤网是否需要更换，培养室是否洁净等。

对策一：组培室所有工作人员必须严格按照规程操作。

对策二：定期检查操作台。

对策三：定期对培养室消毒。方法有:A，新洁尔灭喷雾或拖地；B，70%酒精喷雾。C，紫外灯灭菌6-12小时。D，使用高锰酸钾和甲醛消毒。用量:甲醛1.5ml/m3，高锰酸钾40.75g/m3，24小时后往培养室放氨水(量与甲醛同)。

2 玻璃化瓶苗

玻璃化瓶苗一般出现在继代培养5代以后，若按常规继续扩繁，则下一代仍旧玻璃化，甚至更严重。实践证明，玻璃化瓶苗极难生根。所以对于稀有植物解决玻璃化问题，仍很关键。

对策一，降低培养室温度，保持在16℃以下培养一个周期。

对策二，降低激素水平，甚至不加激素，效果相当显著。另外，光照强度、光照时间长短也有一定影响。采n变化温度、光照强度、光照时间等方法，可有效预防玻璃化瓶苗的出现。发生玻璃化问题后，应根据不同物种、不同玻璃化程度适当采取措施。

3 生根难

组培过程中，常碰到扩繁易、生根难的植物。组培生根，多数是愈伤组织生根，愈伤组织过大、激素配比不合理、温度过高过低、光照强度时间长短不合理、分化苗玻璃化，都能影响组培苗生根。所以对快繁物种，应多设激素水平梯度，选出最佳分化、生根激素浓度配比。然后合理控制温度光照。因为各物种蕉怨狻⑽隆⒓に刂掷嗪团ǘ纫求差别很大，所以不能一概而论。研究者应根据自己的实际情况，采取适当措施。

4 炼苗难

扩繁工作做的再好，炼苗这关把握不好，也将功亏一篑。

首先，应检查塑料大棚主体结构设计是否科学，棚内遮荫、保弧⑽⑴缟枋┦欠衽涮祝布局是否合理，白天温度应保持在18℃-25℃，湿度控制在80%-90%。

其次，炼苗用培养基质配方是否合适，是否消过毒，培养基质透气保水性能如何。

再次，要抓住最佳炼苗时机，一般在分化苗接入生根培养基15-20天，小苗生出3-5个白色细根，根长1-2厘米，此时应是炼苗的最佳时机。如果生根阶段培养时间过长，生出的根系颜色变褐、变黑时再炼苗，小苗成活率会明显降低。因为变褐、变黑的根系已经丧失了活力，在基质中逐渐变腐死亡。

最后，操作人员是否格按要求炼苗，是否定期喷药防治病害等，都将对炼苗工作的顺利完成产生重大影响。