1、培养条件
(1)启动培养基:1/3MS+6BA1.0mg/l(单位下同)+IBA0.02+3%蔗糖;(2)增殖培养基:MS+6BA1.2+IBA0.2+3%蔗糖;(3)生根培养基:1/2MS+NAA0.3+1.5%蔗糖。以上培养基均加入6.0g/l的倍力凝(一种微生物多固化剂),培养温度为25±2℃,pH5.8~6.2,光照度2000Lx,每日10~12h。
2、材料的选择与消毒
选取带腋芽的茎段或2~4cm的嫩梢为外植体,用毛刷蘸洗衣粉轻轻刷洗后用水冲净,置超净工作台上用75%酒精溶液浸泡15s,无菌水冲洗2次,用0.1%HgCl2灭菌1~2min,无菌水冲洗3~5次。
3、接种与增殖
消毒完毕,在无菌条件下用无菌滤纸将外植体表面的水分吸干接种于启动培养基(1)上,置于光照培养室中进行培养。7d后开始生长,当新梢>2~3cm时,将其剪下接人培养基(2)中进行增殖培养,10d后,无菌苗基部开始产生丛生芽,每25~30天继代1次。
4、生根与炼>
当组培苗增殖到一定数量时,将3cm高的芽从基部剪下,接种于生根培养基(3)上进行生根培养,7d后开始有根产生,20d后,苗基部长出4~5条根,根长0.6~1.5cm,生根率达90%,此时可炼苗,将瓶苗移至温室下炼苗3~5天,使小苗健壮。打开瓶口,继续炼苗2~3天,即可移栽。
5、移栽
先洗去附着在根部的培养基,在1000倍的多菌灵溶液中浸泡1~2min,立即栽入经0.1%高锰酸钾A过毒的垤石或河沙中,覆膜保湿,温度控制在25~30%,空气相对湿度在85%以上。待新根长出后,逐渐揭去薄膜,直至全部去除,此时可将苗移入装有腐殖土的营养钵中,移栽成活率在95%以上。