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不同外植体的消毒方法

时间:2019-6-18 浏览数:141
1.茎段和叶片的消毒
植物的茎和叶多暴露于空气中,并且常带有毛、刺等附属物,在栽培上又受到泥土、肥料中杂菌污染,因此在消毒前要用自来水流水冲洗较长时间,然后用沾有肥皂粉或洗洁精的软毛刷刷洗,吸干水分后,再用75%的酒精浸泡10~30s,立即用次氯酸钠溶液浸泡10~15min消毒(按照材料的老嫩和枝条的坚实程度而定);或用0.1%的升汞浸泡5~12min。如果材料表面不平或者有绒毛,可在灭菌液中加几滴Tween-80以强化灭菌效果。材料灭菌后应立即取出,用无菌水冲洗3~5次,用升汞处理的冲洗5~8次,然后用无菌滤纸擦拭干净或沥干,再进行切割和接种。
2.果实及种子的消毒
消毒前,果实或者种子先用自来水清洗,清洗时间根据材料的洁净程度而定。一般10~20min,然后用纯酒精迅速漂洗一次。果实用2%的次氯酸钠溶液浸泡10min后反复用无菌水冲洗,再剖出内部的种子或组织进行接种。对于单个的种子灭菌时先用10%次氯酸钠溶液浸泡20~30min,再用10g/L溴水浸泡5min,然后用无菌水漂洗几次,最后剖出胚或胚乳进行接种。
3.根及地下储藏器官的消毒
这类材料可先用自来水冲洗干净,然后用软毛刷刷洗,用滤纸吸干后再用纯酒精漂洗,接着用20g/L次氯酸钠溶液浸泡20~30min消毒,最后用无菌水漂洗3~4次,滤纸吸干后即可进行接种。
4.花药的消毒
用于组织培养的花药,按小孢子发育时期要求,实际上大多数没有成熟,花药外面有萼片、花瓣或颖片保护着,通常处于无菌状态。所以一般只对整个花蕾或幼穗进行表面消毒。消毒时先去掉花蕾的萼片,用70%酒精擦洗花瓣,然后将整个花蕾浸泡在饱和漂白粉上清液中10min,再经无菌水清洗2~3次,即可接种。

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