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植物脱毒的方法之茎尖脱毒培养

时间:2019-6-15 浏览数:115
1.脱毒原理
病毒在寄主植物体内是随着植物维管系统转移,然而在根尖与茎尖分生组织中没有维管束系统,病毒很难运动,病毒在寄主分生组织的转移速度落后于茎尖生长速度,因此,在植物根尖和茎尖分生组织中不含病毒粒子或者病毒粒子浓度很低。
2.茎尖脱毒方法
2.1取样与消毒
从选定的植株上取顶芽梢段进行消毒接种。取顶芽梢段3-5cm,剥去大叶片,用自来水冲洗,然后用75%的酒精消毒30s左右,用0.1%的升汞消毒10min,最后用无菌水冲洗4-5次。
2.2剥离茎尖与接种
在超净工作台上在8*-40*解剖镜观察下,用解剖刀(针)仔细剥离幼叶,直至露出生长点,用刀尖切下带1-2个叶原基的生长点,将切下的茎尖转移至培养基上。
2.3培养
接种后的材料在(25±2)℃,每天光照10-16h的条件下培养。2个月左右,茎尖可再生出绿芽,期间应更换新鲜培养基。
2.4生根诱导
一些植物茎尖培养形成绿芽后,基部很快生出不定根,而另一些植物则不产生不定根,必须将无根苗转入生根培养基,才能生成不定根成为完整植株。
3. 影响茎尖脱毒培养的因素
(1)茎尖大小:茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比,即茎尖越小,脱毒效果越好。但茎尖大小与茎尖的成活率成正相关,即茎尖越小培养难度越大,成活率越低。综合考虑一般切取0.2-0.5mm带1-2个叶原基的茎尖外植体较合适。
(2)培养条件:在茎尖培养中,光下培养效果通常比暗培养效果好。
(3)外植体的生理状态:茎尖最好从活跃的芽上切取,一般情况下顶芽茎尖比腋芽茎尖效果好。

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