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组织培养育苗的技术

时间:2019-5-9 浏览数:66

组织培养育苗组织塔养也叫微体繁殖,是根据植物细胞全能性的原理,在无菌的条件下,将离体的植物器官、组织、细胞、原生质等在适宜的培养基上培养,促其分裂分化,变成幼苗和成苗的技术。大花藏兰、蝴蝶兰、花烛、风梨、非洲菊、香石竹等重要室内花卉,目前主要用组织培养生产商品苗,上述6种花卉的具体组织培养技术见本书的有关章节。有的脱毒、复壮也用组织培养育苗。
花卉组织培养需要的主要设施和设备(1)化学紫验室一般需15~20平方米的房间,室内有供仪器洗涤、烘干、配制药剂和婚养基的设备:有各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管等玻璃器皿:有精确度0.1克天平用来称量蔗糖、琼脂:精确度1毫克或0.01克天平用来称量大量元素;精确度0.1毫克的分析天平用来称量微量元素和植物生长调节剂(至少要有精确度0.1克和0.1毫克两种天平);还要有冰箱、烘箱、高压蒸汽灭菌锅,水溶钢等。(2)物质常备的物质有琼脂,各种无机盐,如常用的硝酸钾、磷酸二慈钾、硫酸镁、维生素、氨基酸、糖类,细胞分裂素,如6-卡基腺嘌呤(6-BA),植物生长调节剂,如苯乙酸等,(3)接种室接种室由两间连在一起的房间组成,其中一间作准备室,另一间作接种室,都婆有照明灯和紫外灯。接种室内摆放操作台,放置酒精灯、接种工具、试管、三角瓶等,有条件的最好用水平净化工作台,并将它放在无菌室内,经济条件差也可用接种箱来接种,但生产量大时用起来不方便和费工。(4)培养室培养室用于将接种到试管、三角瓶、罐头瓶等玻璃容器内的微小植物体(外植体)进行培养生长的场所,培养室要有放置玻璃容器的培养架;要有控源设备,能调节和保持恒温的能力:培养室要有补光照明灯和调节光照度的能力,并设有定时器加以自动控制。
母液和培养基把塔养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1000倍称量后配制成一种浓溶液,称为母液。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。花卉组培(组织培养)常用的培养基配方很多,以MS培养基应用最多,MS是Mu-rashige和Skoog的缩写,他们两人于1962年研究出这种培养基,被广泛应用,常用培养基还有ER、B.、SH、HE、改良White等。
下面以MS培养基为例,简要介绍配制方法。母液的配制配制母液时一定要按照下面的要求进行:可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的,不能放在同一个容器中:配制母液要用重蒸馏水:药物要使用分析纯或等级较高的化学纯;药物的称量和溶液的定容都要准确。每液配好后贴上标签,放在0~4℃的冰箱中,可使用半年到1年,这样做可节省许多①母液A:硫服镁18.5克、萌酸渡82.5克,确酸得95、0克。加水定容到1000毫升、程1升墙养基时量取20毫升母液。母流B:氯化钙22.0克,加水定容到500毫升,配1升培养基时量取10毫升母液。①母流C:磷酸二氢解8.5克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。①母液D:乙二胺四乙酸二销3、73克,硫酸亚铁2、78克,加水定容到1000毫升,配1升培养基时量取10毫升母液。③母液E:福股620毫克,硫酸锰2230毫克、硫酸锌860毫克,硫酸钢2.5毫克,碘化舞83毫克,相酸钠25毫克,氯化钻2.5毫克,加水定容到1000毫升、配1升培养基时量取10毫升母液。⑤母液F:肌醇5克,甘氨酸100毫克,烟酸25毫克,盐酸吡够醇25毫克,盐酸硫谈素5毫克。加水定容到500毫升,能1升培养基时量取10毫升母液,培养基的配制配制每1000毫升培养基,称取6~10克球脂作凝固剂,具体按配方要求称量,数在水浴钢上慢慢溶解、先在量简内放人一定量的水,按照母液顺序和规定量,量取母微、当母流加完脑,根据配方的要求再加人生长测节物横如引嗓乙酸成察乙酸,还有细胞分裂素等。细胞分裂素应用最多的是6-节基腺嘌呤,加完后倒人已溶化的琼脂中每1000毫升培养基加人蔗糖30克或根据要求确定,定容到所需的体积。继续加温,直到擦酯完全溶解,用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH值进行调节,多数培养基的pH值在5.4~6.0,MS培养基的pH值为5.7、将配好的培养基趁热倒人培养容器中,培养基占容器体积的1/8-1/4.不要将培养基沾到容器壁上,否则容易被杂菌污染,然后及时加盖,进行高压灭菌,灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用,在121℃、压力111千帕下维持15~20分钟,温度和时间都要严格控制,到时间后立即切断电源,当高压锅内压力降到常压后,开启放气阀,打开锅盖,取出灭菌的培养基,放在接种室中培养3天,确定没被感染后才能用来组织培养。

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